步骤

服务内容

质控标准

周期

Step1：抗原准备

抗原类型：

(1) 重组蛋白制备；

(2) 小分子（改造）+偶联；

(3) 多肽合成+偶联；

(4) 客户提供灭活病毒；

(5) 客户提供封装好的mRNA；

1) 重组蛋白(纯度>85%)；

2) 小分子纯度>90%；

3) 多肽纯度>90%；

4-6周

Step2：免疫及血清效价检测

(1) 动物免疫4次，加强免疫一针，共计免疫5针；

(2) 免疫前采集阴性血清，第4针采血进行ELISA检测血清效价；

(3) 若第4针血清抗体效价满足要求，则采血前7天再次加强免疫1针，如不满足要求，则继续常规免疫；

(4) 效价合格，采血分离单核细胞；

1) 动物：背景清晰；

2) 免疫原：

蛋白/病毒抗原效价检测；

多肽/小分子抗原效价检测；

7-10周

Step3：噬菌体文库构建

(1) PBMC总RNA提取；

(2) 高保真RT-PCR制备cDNA；

(3) 根据cDNA进行PCR扩增并连接到噬菌体载体上，转化菌体构建VHH噬菌体文库。

1) 文库阳性率检测；

2) 文库插入性率检测；

3) 库容检测+序列检测；

4) VHH序列筛选标准设定；

3-4周

Step4:噬菌体表面展示筛选、阳性单克隆纳米抗体鉴定

(1) 使用重组表达的蛋白/细胞做为固相抗原，开展2-3轮筛选，获得富集的抗原特异性噬菌体。

1)复筛后阳性单克隆的DNA序列与氨基酸序列检测；

3-4周

Step5：阳性单克隆纳米抗体重组表达、纯化

(1) 对于复筛得到的阳性单克隆微生物，提取DNA质粒、转化至大肠杆菌（BL21-DE3）、小量重组表达纯化，得到单克隆纳米抗体。

(2) 将阳性单克隆纳米抗体DNA序列重新构建至pet-22b原核表达载体。

1)特异性与亲和力（KD）测试，鉴定单克隆纳米抗体是否是真阳性

1-2周

Step5：QC分析

(1) SDS-PAGE及UV分析

(2) ELISA验证抗体与抗原结合；

(3) BLI法验证抗体亲和力（可选择）；

(4) 细胞功能验证（可选择）；

1) EC50 验证；

2) 快速亲和力测定结果；

1-2周